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酵母表面展示

Novel Yeast display-based single domain antibody discovery platform 

酵母表面展示(Yeast surface display)技术广泛用于抗体文库筛选、抗体体工程等领域。NBbiolab纳米抗体研发中心积累多年抗体发现技术经验,成熟高效的酵母展示、筛选系统平台,为客户高效的发现高亲和力、高稳定性的纳米抗体。NBbiolab是目前国内唯一能提供Yeast display高通量发现纳米抗体服务的高新技术企业。


技术原理

将纳米抗体与酵母细胞壁上的Aga2蛋白进行融合表达,Aga2融合蛋白通过两个二硫键与α-凝集素Aga1蛋白连接,从而在酵母细胞表面上产生共价复合物。 在该系统中,编码Aga1蛋白的基因稳定整合到酵母染色体中,而编码蛋白质支架-Aga2融合体的基因克隆到环状酵母展示质粒载体中,该载体使用营养标记物在酵母中维持选择性生长。 通过培养基中加入半乳糖诱导酵母进行表面展示,再结合磁珠及FACS分选技术进行多轮筛选,可得到高亲和力、高稳定性的克隆。


Yeast display 原理与流程

Fig。1。 Yeast display 原理与流程


技术优势

Yeast display 与 Phage display 相比,酵母表面展示具有以下显著优势:

1、 酵母具有类似于高等真核生物的分泌途径, 蛋白质折叠在内质网中,其中伴侣蛋白,折叠酶和质量控制机制确保仅分泌正确折叠的蛋白质。而噬菌体是原核系统,有些抗体对大肠杆菌有毒的克隆,其生长缓慢甚至不生长,导致文库的偏向与克隆的丢失。

2、通过噬菌体展示筛选更高亲和力的抗体时,通常会受到筛选处理过程的不利影响,不仅取决于亲和力,还取决于抗体表达水平。而酵母展示系统采用FACS分选技术,基于抗体亲和力及展示水平进行筛选,因此消除了表达引起的偏差,且能区分相差很小亲和力的克隆。

3、酵母展示是多价展示,能够一次通过Sorting直接分选高,中&低亲和力的克隆,非常方便

4、通过使用双染色的 FACS,可以直接在酵母细胞表面上确定抗体亲和力,从而无需耗时的亚克隆、表达和纯化。

5、抗体筛选速度快,3min即可完成10万个细胞的分选,获得100+的unique sequence 候选克隆。

6、在相同的展示系统下可对抗体的亲和力和稳定性进行优化。


参考文献

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